本发明涉及生化检测技术领域，具体公开了一种检测恩替卡韦中遗传毒性杂质的方法与应用。本发明检测恩替卡韦中遗传毒性杂质的方法，采用高效液相色谱法，具体采用流动相A和流动相B进行线性梯度洗脱；所述流动相A和所述流动相B均为：磷酸二氢钠溶液‑乙腈，其中，磷酸二氢钠溶液的浓度为0.02‑0.024mol/L，pH值为2.3‑2.7；所述流动相A中磷酸二氢钠溶液与乙腈的体积比为（85‑90）：（10‑15）；所述流动相B中磷酸二氢钠溶液与乙腈的体积比为（25‑30）：（70‑75）。本发明的检测方法灵敏度高，准确度高，耐用性好。 null