一种葡聚糖酶突变体及其应用，是以如SEQ ID NO：1所示的葡聚糖酶BisGlu16B_∆C为母本对氨基酸残基Ala299突变后得到的一种突变体A299W。热稳定性方面，突变体A299W在60℃下的半衰期较野生型延长7.7倍，长达130分钟；pH耐受性方面，突变体A299W在pH7‑pH12之间剩余酶活较野生型提高2.2‑58倍；在催化活力方面，以大麦葡聚糖为底物时，突变体的催化效率较野生型提高94%。这样一种耐热、耐酸碱且高催化的β‑1,3‑1,4‑葡聚糖酶突变体，在啤酒酿造、饲料添加以及生物能源等领域具有广阔的应用前景。
