本发明的一种预防林麝肺炎的三联灭活疫苗的制备方法,包括如下步骤:步骤1,从发病林麝体内分离获得致病性大肠杆菌、假铜绿单胞菌、肺炎克雷伯菌,上述菌种采用冷冻干燥的方法保存;步骤2,将三种细菌分别置于培养基37℃培养后,扩大培养,对菌液用浓度为4‰的甲醛进行灭活24h;步骤3,将各菌种用灭菌生理盐水稀释到8.0×109cfu/mL;步骤4,将致病性大肠杆菌、假铜绿单胞菌、肺炎克雷伯菌按照2:2:1比例混合,加入各1万单位的青链霉素,通过搅拌装置混匀得到三联灭活疫苗。该方法制备的疫苗价格低廉,易于操作,免疫效果良好。